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ZETA LIFE細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)-CCK試劑盒

品牌：ZETA LIFE .

貨號(hào)：K009

產(chǎn)地：USA

英文名:cck8

保質(zhì)期:24 months

保存條件:4°C避光保存

規(guī)格:500T-3000T

ZETA LIFE細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)-CCK試劑盒

CellCounting Kit簡稱CCK試劑盒，是一種基于WST (水溶性四唑鹽，化學(xué)名: 2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯基) -5-(2,4-二磺基苯) -2H四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

CCK是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其他MTT類似產(chǎn)品如XTT. MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn):

-CCK被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成的formazan是水溶性,不需要有特定的溶解液來溶解，而WST和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都不是水溶性的，因而可以省去后續(xù)溶解步驟。

-CCK比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。

-CCK和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

CCK法與其他檢測(cè)方法之間的比較：

操作說明:

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測(cè)定細(xì)胞具體數(shù) 量時(shí))

1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2、按比例(例如: 1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成-一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度， 每組3-6個(gè)復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng)2- 4小時(shí)使細(xì)胞貼壁,然后加CCK試劑培養(yǎng)-定時(shí)間后測(cè)定OD值， 制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸),

OD值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一

致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時(shí)間)。

二、 細(xì)胞活性檢測(cè)

1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ul孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在379C, 5% CO2的條件下)。

2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育14小時(shí)。

4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

5、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)

板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

三、細(xì)胞增值~毒性檢測(cè)

1、在96孔板中配置100u的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在379C，5% CO2的條件下)。

2、向培養(yǎng)板加入10ul不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如: 6、 12、24或48小時(shí))。

4、想每孔加入10ul CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。

5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

6、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

7、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

注意:如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基)，去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

備往:

①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入

CCK試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。

③白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。

④當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的小接種量至少為1 ,000個(gè)/孔L(100u培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此

推薦接種量不低于2500個(gè)/F孔(100ul培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。

⑤如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450nm濾光片的檢測(cè)靈敏度較高。

⑥培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

動(dòng)計(jì)算:

細(xì)胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]x100

A(加藥):具有細(xì)胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培養(yǎng)基和CCK溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度

A(0加藥):具有細(xì)胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

保存條件:

49C避光保存，有效期一年。

溫聲提示:不可用于臨床治療。