產(chǎn)品貨號(hào): K009-100、K009-500、K009-1000、K009-3000
產(chǎn)品規(guī)格: 100T/500T/1000T/3000T
產(chǎn)品品牌:Zeta Life
產(chǎn)品概述：
CellCounting Kit簡(jiǎn)稱CCK試劑盒，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。
CCK是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其他MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)：
-CCK被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成的formazan是水溶性，不需要有特定的溶解液來(lái)溶解，而WST和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都不是水溶性的，因而可以省去后續(xù)溶解步驟。
-CCK比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。
-CCK和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。
CCK毒性：CCK和其他檢測(cè)方法相比，對(duì)細(xì)胞幾乎無(wú)毒性，不傷害細(xì)胞，細(xì)胞可重復(fù)利用。
CCK應(yīng)用：藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏實(shí)驗(yàn)。
操作說(shuō)明：
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí))
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2、按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加CCK試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，OD值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時(shí)間)。
二、細(xì)胞活性檢測(cè)
1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ul/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5% CO2的條件下)。
2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。
5、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值-毒性檢測(cè)
1、在96 孔板中配置100ul的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在37℃，5% CO2的條件下)。
2、向培養(yǎng)板加入10ul不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如：6、12、24或48小時(shí))。
4、想每孔加入10ul CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。
7、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基)，去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
備注：
① 建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
② 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入
CCK試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁(yè)面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。
③ 白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
④ 當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100ul培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100ul培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。
⑤ 如果沒(méi)有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測(cè)靈敏度最高。
⑥ 培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。
活力計(jì)算：
細(xì)胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100
A(加藥)：具有細(xì)胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具有培養(yǎng)基和CCK溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A(0加藥)：具有細(xì)胞、CCK溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
保存條件：
4℃避光保存，有效期一年。
美國(guó)Zeta Life公司成立于1989年，是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM/F12主要完成人，有三十多年的胎牛血清、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基、以及干細(xì)胞、免疫細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞等多種不同類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)液生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)；也是目前世界胎牛血清、無(wú)血清培養(yǎng)基最大的供應(yīng)商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫(yī)師檢驗(yàn)證明及品質(zhì)測(cè)試報(bào)告；
2018年美國(guó)Zeta Life公司與美國(guó)加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)活細(xì)胞、活體動(dòng)物體轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為蛋白功能、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。
上海市楊浦區(qū)國(guó)康路100號(hào)2層
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