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一．RAW264.7細(xì)胞

細(xì)胞取材于Abelson小鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤組織，是科研上尤為常用的炎癥細(xì)胞模型之一。該細(xì)胞易于增殖，有高效DNA轉(zhuǎn)染力，對RNA干擾敏感，常用作轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞和復(fù)制小鼠諾如病毒。細(xì)胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原陰性。據(jù)報(bào)道，該細(xì)胞建系后已不分泌且檢測不到病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成實(shí)驗(yàn)陰性。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞，LPS或PPD處理2天后可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細(xì)胞無作用。

二、產(chǎn)品說明

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號：AD600150

規(guī)格：1.5ml

3、儲存條件

常溫運(yùn)輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。

三、產(chǎn)品應(yīng)用

各種細(xì)胞類型中最高的轉(zhuǎn)染效率。

可用于多種真核細(xì)胞系的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染；

可用于各種原代細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染；

可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞，如:T細(xì)胞、NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1等；

可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

四、使用說明

1、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。