NuSmart®核酸直接釋放技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)核酸提取技術(shù)差別
基因組DNA提取作為分子生物學(xué)最常規(guī)技術(shù)之一是每個(gè)實(shí)驗(yàn)室研究人員最熟悉的技術(shù)。而想獲得基因組DNA只需要將核酸外的結(jié)構(gòu)破壞就能夠?qū)⒑怂後尫懦鰜怼３Ｒ娪幸韵聨追N方法，包括機(jī)械力裂解、酶裂解以及化學(xué)裂解。這幾種方法的區(qū)別見下表：
方法 | 機(jī)械力裂解 | 酶裂解 | 化學(xué)裂解 |
原理 | 外力破壞細(xì)胞壁和/或細(xì)胞膜 | 消化蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)以及破壞組蛋白的纏繞 | 緩沖液體系中加入去垢劑破壞脂膜并釋放內(nèi)部成分 |
優(yōu)勢(shì) | 操作簡單、快速 | 無需機(jī)械力 | 操作簡單 無需其他設(shè)備 |
劣勢(shì) | 多樣本時(shí)比較耗時(shí) 處理過長中產(chǎn)熱導(dǎo)致基因組降解 基因組容易斷裂 需要研磨設(shè)備 | 價(jià)格昂貴 耗時(shí)
| 釋放的抑制物對(duì)下游擴(kuò)增有影響 不適合細(xì)胞器基因組的獲得
|
落實(shí)在產(chǎn)品上，實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)核酸提取純化包括有機(jī)提取、硅膠柱離心提取、磁珠吸附提取。這幾種方法對(duì)比如下表：
方法 | 有機(jī)提取 | 硅膠柱提取 | 磁珠提取 |
原理 | 苯酚-氯仿抽提和離心進(jìn)行分離和純化 | 通過機(jī)械力和/或酶裂解釋放核酸，硅膠柱與其形成靜電吸附，通過離心和鹽粒子洗滌進(jìn)行分離純化 | 通過機(jī)械力和/或酶裂解釋放核酸，帶電磁珠與其吸附，在磁場(chǎng)作用下進(jìn)行分離純化 |
樣品 | 細(xì)胞、組織、植物等 | 所有樣品類型 | 所有樣品類型 |
純度 | 中 | 高 | 高 |
通量 | 低通量 | 中通量 | 高通量 |
優(yōu)勢(shì) | 充分裂解 價(jià)格便宜 特別適合難處理樣本 | 操作方便 產(chǎn)量和純度都高 可處理多種樣本 | 產(chǎn)量高 不會(huì)堵塞 可設(shè)備自動(dòng)化操作 |
劣勢(shì) | 使用有毒有害化學(xué)試劑 不易購買 | 容易堵塞 產(chǎn)量有上限 | 不利于微量樣本操作 |
耗時(shí) | 30-60分鐘 | 30-60分鐘 | 30分鐘 |
通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)以上方法操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力且危險(xiǎn)，為了解決這一問題，我們推薦NuSmart®核酸直接釋放技術(shù)。該方法只需要5分鐘，不同溫度環(huán)境下，無需重復(fù)訓(xùn)練即可完成核酸直接釋放。結(jié)合下游開發(fā)試劑盒，能夠滿足常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的需求。
方法 | （NuSmart®核酸直接釋放技術(shù)） | 標(biāo)準(zhǔn)/傳統(tǒng)核酸提取法 |
原理 | 通過試劑破壞細(xì)胞壁/膜和細(xì)胞核膜，釋放基因組DNA。特殊納米材料提高PCR靈敏度 | 通過機(jī)械力和/或酶裂解細(xì)胞釋放核酸，硅膠柱等材料與其吸附，通過離心/磁場(chǎng)作用進(jìn)行提取純化 |
樣品 | 任何樣本類型 | 任何樣本類型 |
樣品量 | 細(xì)胞：1-103個(gè) 組織：1-2mm 植物葉片：1-4mm 微生物培養(yǎng)液：10uL | 細(xì)胞：＞106個(gè) 組織：＞10mg 植物葉片：＞100mg 微生物培養(yǎng)液：0.5-1mL |
耗時(shí) | 5分鐘 | 30-60分鐘 |
通量 | 高通量 | 硅膠柱法：中通量 磁珠法：高通量 |
優(yōu)勢(shì) | 對(duì)于小量和微量樣本十分友好 操作簡單，無需訓(xùn)練 基因組完整性好 無酶、無有機(jī)試劑 無大型設(shè)備投入 |
操作方便 產(chǎn)量高 純度高 |
劣勢(shì) | 基因組容易斷裂 操作步驟多、費(fèi)時(shí) 需要設(shè)備 |
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